Статья в журнал Академии наук Украины

Статья в журнал Академии наук Украины
УДК 578.85/86:543.45

 АНТИВИРУСНЫЕ И ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИЕ СВОЙСТВА
ПРЕПАРАТА ИЗ ПРОРОСШЕГО ЗЕРНА ПШЕНИЦЫ «ЖИЗНЬ»

 А.П. Левицкий1, И.Г. Маник2, С.А. Демьяненко1

1 ГУ "Институт стоматологии АМН Украины"
2 ЧП "И.Г. Маник" торговая марка «ЖИЗНЬ»  - производитель и поставщик ростков пшеницы и сока из ростков пшеницы.

 Ключевые слова: проростки пшеницы, вирус гриппа, иммунитет, фагоцитоз.

Проросшее зерно пшеницы обладает широким спектром биологического действия, проявляя лечебно-профилактические свойства при экспериментальной патологии (стресс, язва желудка, пародонтит) [4, 7, 8], а также в клинике [5, 10]. Основное количество биологически активных веществ проросшего зерна пшеницы, представленные, главным образом, полифенолами [9], сосредоточено в проростках.

Учитывая исключительную роль микробного фактора в этиологии и патогенезе подавляющего числа заболеваний, можно было предположить, что и полифенольные соединения проростков пшеницы оказывают свое лечебно-профилактическое действие путем влияния на микробный фактор.

Цель работы - изучить влияние препарата из проростков пшеницы на размножение вирусов и состояние антимикробного иммунитета.

Материалы и методы. При выполнении работы были использованы беспородные белые мыши 18-26 г; вирус гриппа А/PR/8/34 (HINI), куриные эмбрионы, препарат из сока проростков пшеницы «ЖИЗНЬ» (Биотрит) с концентрацией экстрактивных веществ 4,2 %.

Вирусологические методы:

- Пассирование вируса гриппа на мышах. С этой целью животное под легким эфирным наркозом интраназально заражали 0,05 мл аллантоисной жидкостью, содержащей вирус. Через 8 часов мышь умерщвляли, стерильно извлекали легкие, растирали их в ступке со стеклом, добавляли физиологический раствор с антибиотиками из расчета 2 мл физиологического раствора на одно легкое. После центрифугирования при 2000 g в течение 10 минут 0,1 мл надосадочной жидкости вводили интраназально другому животному и т.д.

- Накопление вируса гриппа на куриных эмбрионах. Для этого использовали надосадочную жидкость, полученную из гомогената легких мышей после нескольких пассажей вируса. Заражали 11-дневные куриные эмбрионы в аллантоисную полость 0,2 мл разведенного в логарифмической прогрессии заражающего материала и инкубировали 48 часов при температуре 370С. После этого стерильно отсасывали аллантоисную жидкость, в которой определяли титры вируса по данным реакции гемагглютинации (РГА) [1, 2]. Аллантоисная жидкость эмбрионов, титры РГА в которой были равны 1:128 и выше, объединялись и стерильно разливались по 1 мл во флаконы с последующим хранением при -260С.

- Титрование инфекционности вируса гриппа на мышах при интраназальном методе заражения. В этом случае в каждой группе из 4-6 мышей интраназальное заражение осуществляли под легким эфирным наркозом, используя по 0,05 мл аллантоисной жидкости с содержанием вирусов кратным 10 (1 lg). Наблюдение за животными осуществляли в течение 15 дней, ведя учет гибели, начиная с 1 суток.

Иммунологические методы:

- Гемолитическую активность сыворотки и спленоцитов оценивали спектрофотометрическим методом по количеству связавшихся с антителами и лизированных в присутствии комплемента эритроцитов барана [3]. Число розеткообразующих клеток (РОК) определяли путем подсчета количества лимфоцитов с пятью и более прикрепившимися ксеногенными эритроцитами [14]. Количество антителобразующих клеток (АОК) в селезенке определяли путем подсчета числа зон локального гемолиза в жидкой среде, содержащей эритроциты барана, сенсибилизированные спленоциты и комплемент [11]. Тирты гемагглютининов и гемолизинов определяли методом последовательных двухкратных разведений с помощью микротитратора Такачи [6]. При изучении гуморального ответа животных иммунизировали внутрибрюшинным введением многократно отмытых в физрастворе эритроцитов барана в дозе 5Ч108 клеток на одну мышь. Исследование проводили на пятые сутки после введения эритроцитов.

- Функциональную активность макрофагов оценивали по их способности изменять интенсивность фагоцитоза дрожжевых клеток Saccharomyсеs cerevisiae [12] и восстановления этими клетками нитросинего тетразоля (НСТ-тест) [13].

Расчет ЛД50 проводили методом Кербера в моификации Ашмарина [1, 2] по формуле:

ЛД50 = -lgДn - d(∑лi - 0,5),

где Дn - доза, дающая максимальный эффект; лi - отношение числа животных, погибших при заражении данной дозой, к общему числу зараженных этой дозой; i - номер дозы (минимальную дозу принимают за первую); d - логарифм кратности разведения.

Результаты и их обсуждение. Антивирусную активность препарата из проростков пшеницы исследовали на мышах, которым per os вводили по 7,2 мг экстрактивных веществ из проростков на мышь в сутки в течение 15 дней до заражения и 15 дней после заражения. Заражение вирусом гриппа осуществляли под легким эфирным наркозом интраназально в дозе 0,05 мл вируссодержащей жидкости с различными разведениями (1Ч10-1…1Ч10-10). В каждой группе находилось по 6 животных. Гибель учитывали в течение 15 дней после заражения и рассчитывали ЛД50.

Предварительно вирус был трижды пропассирован на мышах и затем накапливался в аллантоисной жидкости 11-дневных куриных эмбрионов через 48 часов после их заражения предельными разведениями гомогенатов легких (1:10-5 и 1:10-6), при этом гемагглютинирующая активность вирусного материала, полученного при заражении эмбрионов, равнялась 1:512.

Анализ динамики гибели мышей, зараженных вирусом гриппа и получавших препарат из проростков пшеницы, представлены на рис. 1 в виде кумулятивных lgЛД50, свидетельствует о том, что гибель животных в контрольной группе началась на 3-й день, тогда как в опытной на 4-й день.

Начиная с 9-х суток после заражения гибель животных в опытной группе была достоверно ниже, чем в контрольной. С 11-го и в последующие дни различие в lgЛД50 между опытной и контрольной группами составило 1,5 ед.

Снижение lgЛД50 свидетельствует о повышении патогенности возбудителя либо о снижении устойчивости организма к инфекции.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что введение препарата из проростков пшеницы повышает устойчивость животных к тяжелым формам гриппозной инфекции более, чем в 30 раз.

Динамика гибели животных дает веские основания полагать, что защитное действие препарата в первую очередь обусловлено его иммуностимулирующим и антибактериальным действиями, поскольку статистически значимые различия в гибели животных имели место в поздние сроки, тогда как для прямого антивирусного действия характерны различия в более ранние сроки.

Результаты исследования иммуностимулирующих свойств препарата из проростков пшеницы представлены в табл. 1, из которой следует, что стимулирующий эффект препарата наиболее отчетливо проявляется на фоне сниженной активности путем введения субоптимальной дозы антигена (эритроцитов барана). При этом отмечается увеличение уровня всех изученных показателей в 2-2,5 раза.

При введении препарата из проростков пшеницы животным, получавшим оптимальную дозу антигена на фоне введения циклофосфана (50 мг/кг) также отмечена способность исследуемого препарата ослаблять иммунодепрессивные эффекты цитостатика.

Результаты исследований влияния препарата из проростков пшеницы на функциональную активность макрофагов представлены в табл. 2. Препарат вводили экспериментальным животным за сутки до взятия крови.

Представленные в табл. 2 данные свидетельствуют о значительном возрастании функциональной активности макрофагов под влиянием исследуемого препарата. В клетках синхронно увеличивается фагоцитарная способность и суммарный уровень окислительно-восстановительных процессов. Возрастание интенсивности НСТ-теста дает основание предполагать, что препарат из пшеницы стимулирует бактерицидность фагоцитов.

Подводя итог проведенным исследованиям, можно заключить, что препарат из проростков пшеницы обладает антивирусным и иммуномодулирующим действиями, которые заключаются в способности стимулировать подавленные реакции гуморального иммунитета и активировать фагоцитоз. Это дает основание рекомендовать препарат из проростков пшеницы в качестве лечебно-профилактического средства при хронических заболеваниях, а также при угнетении иммунной системы, вызываемой введением антибиотиков и под действием различных токсикантов.

 
stat-1
Рис. 1. Влияние препарата из проростков пшеницы на кумулятивный lgЛД50
при моделировании у мышей экспериментального гриппа.

  

Таблица 1

Влияние препарата из проростков пшеницы на гуморальный иммунный ответ (n = 6-8; M ±m)
stat-2

 Примечание: * - различия достоверны по сравнению с контролем данной группы; гемолитическая активность спленоцитов выражена числом эритроцитов барана, лизированных 106 спленоцитов; гемолитическая активность сыворотки выражена числом эритроцитов барана, лизированных 25 мкл сыворотки.

 
Таблица 2

Влияние препарата из проростков пшеницы на функциональную активность макрофагов
(n = 8; M ± m)
stat-3
 

 



 
+38 048 734-60-21
www.you-life.com (С) Все права защищены
Украина. Одесса. 2012